熒光法因其具有靈敏度高，取樣量少等特點，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于生化、化學(xué)、藥物分析、食品檢驗、 地理、冶金、醫(yī)學(xué)、環(huán)境科學(xué)和生命科學(xué)研究等各個領(lǐng)域。熒光分析法的發(fā)展與儀器應(yīng)用的發(fā)展是密不可分的。本文介 紹了熒光分光光度計的結(jié)構(gòu)、分類、應(yīng)用。

熒光法的固有靈敏度高,取樣量少，檢測限通常比 吸收光譜法低1~3個數(shù)量級,可達ng ﹒m l- 1級；線性范 圍也常大于吸收光譜,又有熒光壽命，熒光量子產(chǎn)率，激 發(fā)峰波長，發(fā)射峰波長等多種參數(shù)因而有較好的選擇 性[1]。但也由于熒光法的高靈敏度,使得定量熒光法引 入嚴(yán)重的基體干擾,熒光法在定量分析的應(yīng)用不如吸收 光譜法,因為吸收紫外可見光的物質(zhì)種類要比吸收相應(yīng) 區(qū)域輻射而產(chǎn)生熒光的物質(zhì)多。目前熒光分析法廣泛應(yīng) 用于生化、化學(xué)、藥物分析、食品檢驗、地理、冶金、 醫(yī)學(xué)、環(huán)境科學(xué)和生命科學(xué)研究等各個領(lǐng)域。 熒光儀器是用來測定熒光物質(zhì)的性質(zhì)和含量的分 析儀器，通常分兩大類：熒光光度計和熒光分光光度 計[2]。熒光分光光度計技術(shù)在現(xiàn)代科學(xué)的發(fā)展中正顯 示出*的作用，越來越得到人們的重視。下面將對 熒光分光光度計的結(jié)構(gòu)，分類，發(fā)展和應(yīng)用作以簡單 介紹。 1 熒光分光光度計的結(jié)構(gòu) 一般熒光分光光度計由光源、激發(fā)光源、發(fā)射 光源、試樣池、檢測器、顯示裝置等組成。 1.1 光源 光源應(yīng)具有強度大、適用波長范圍寬兩大特點,常 用光源有高壓汞燈、氙燈、氙- 汞弧燈等。此外，紫外 激光器、固體激光器、高功率連續(xù)可調(diào)染料激光器和二 極管激光器等熒光光源把熒光法的應(yīng)用范圍拓寬。 1.2 濾光片和單色器 在熒光光度計中，通常采用干涉濾光片和吸收 濾光片作為激發(fā)光束和熒光輻射的波長選擇器。在熒 光分光光度計中至少選用一個，而常常是用兩個光柵 單色器，且均帶有可調(diào)狹縫，以供選擇合適的通帶。理想的單色器應(yīng)在整個波長區(qū)內(nèi)有相同的光子通 過效率，不幸的是這種理想的單色器不存在。 1.3 檢測器 一般普通的熒光分光光度計均采用光電倍增管作 為檢測器。它是很好的電流源，在一定條件下其電流 量與入射光強度成正比。此外，還有光導(dǎo)攝像管、電 子微分器、電荷耦合器陣列檢測器。 1.4 顯示裝置 以前，顯示裝置有數(shù)字電壓表，記錄儀和陰極示 波器等，現(xiàn)在，人們可以通過計算機軟硬件技術(shù)根據(jù) 不同要求，來選擇不同的直觀的視頻讀出方式[3]。 2 熒光分光光度計分類 熒光分光光度計的發(fā)展經(jīng)歷了手控式熒光分光光 度計，自動記錄式熒光分光光度計，計算機控制式熒 光分光光度計三個階段；熒光分光光度計還可分為單光束式熒光分光光度計和雙光束式熒光分光光度計兩 大系列。其他的還有低溫激光Sh p ol’skill熒光分光光 度計，配有壽命和相分辯測定的熒光分光光度計等。 3 熒光分光光度計應(yīng)用 理論上，具有剛性結(jié)構(gòu)和平面結(jié)構(gòu)的分子；π電 子共軛體系的分子；給電子取代基的化合物都可用直 接熒光法測定。間接熒光法測定是目標(biāo)分析物本身不 具備熒光發(fā)射能力,但具備使某種熒光物質(zhì)熒光猝滅的 能力,或者可以通過氧化還原偶聯(lián)酶催化等手段使其轉(zhuǎn) 化為熒光物質(zhì),而進行間接測定[4]。以下是熒光分光光 度計在現(xiàn)代各科學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用： 3.1 環(huán)境檢測領(lǐng)域: 熒光分光光度計檢測技術(shù)已經(jīng)成為環(huán)境污染監(jiān)測 中污染物定性和定量分析的有效手段。如不同類型不 同場地的石油及其產(chǎn)品成份各有不同,其熒光光譜也有 著顯著的區(qū)別,利用油標(biāo)可在激發(fā) 310nm ,發(fā)射 365 nm 處測量淤泥和海水中油污樣品中總油的含量.還可以對 機油、柴油、重油、原油及液壓油進行初步鑒定[5]；空 氣塵埃中多環(huán)芳烴的檢測。其他如陰離子表面活性劑 作為洗滌劑污染的主要成份,葉綠素a、葉綠素b、脫鎂 葉綠素 a和脫鎂葉綠素 b 作為水環(huán)境浮游植物生物量 和水體富營養(yǎng)化的重要指標(biāo)以及多環(huán)芳烴等都可用熒 光分光光度計測量。 3.2 食品和藥物成份分析領(lǐng)域： 曾用熒光法分析食品和藥品中的化合物如：:維 生素 A 、維生素 B1、B2（核黃素）、B6 、B1 2、維 生素BC(葉酸或蝶酰谷氨酸)、維生素C、維生素D、維 生素E(生育酚)、維生素P(蘆丁)、維生素F（煙酸）、維 生素 K，抗生素藥中的青梅毒、金霉素、四環(huán)素、抗 霉素、鏈霉素和放線菌素D等以及吩噻嗪 類藥物、奎諾酮類藥物、利血平、異煙肼、6- 巰 基嘌呤等[6]。 3.3 醫(yī)學(xué)和生命科學(xué)及其相關(guān)領(lǐng)域: 多種氨基酸的分析、在肌肉和心臟疾病中非常 注意細(xì)胞內(nèi)離子濃度的測定；核糖核酸（RNA）和 脫氧核糖核酸（DNA）的相關(guān)研究，如 DNA、RNA 的檢測和定量，用以鑒別病毒細(xì)菌等的 DNA/酶相互 作用研究，DNA 密碼的改變導(dǎo)致癌癥病因研究，能斷 裂DNA限制酶測定，熒光PCR(DNA的放大)的研究等; 蛋白質(zhì)和酶的作用研究，如DNA的表達、細(xì)胞膜流動 性及細(xì)胞膜內(nèi)蛋白質(zhì)研究、涉及抗體、蛋白質(zhì)和酶的 ELISA 測定研究、酶活性測定等[7]。尤其是各種新型 蛋白和核酸熒光標(biāo)記物的引入，各種熒光酶聯(lián)免疫分 析技術(shù) 、偏振熒光測定技術(shù)以及為克服生物樣品紫外 區(qū)背景熒光和散射光的嚴(yán)重干擾而提出的近紅外區(qū)熒 光測定技術(shù)的發(fā)展，為醫(yī)學(xué)和生命科學(xué)領(lǐng)域提供了豐 富的研究手段。