伴隨著分光光度計(jì)在各領(lǐng)域內(nèi)廣泛應(yīng)用，分光光度 計(jì)所起到的作用日益凸顯，但是部分單位對(duì)分光光度計(jì)原理了 解有限，所以本文就分光光度法、分光光度原理及應(yīng)用進(jìn)行分 析研究，希望能夠增加對(duì)分光光度法及分光光度計(jì)的了解 程度。

分光光度法是在比色法的基礎(chǔ)條件之上所發(fā)展出來(lái)的。 比色法在實(shí)際應(yīng)用過(guò)程中，僅僅局限于應(yīng)用在可見(jiàn)光驅(qū)內(nèi)，但 是分光光度法能夠在紫外光與紅外光內(nèi)去應(yīng)用。比色法主要 應(yīng)用單色光，所涉及到的譜帶寬度和整體精度都十分有限。分 光光度法與真正單色光較為貼近，光譜帶寬度不會(huì)超過(guò)35mm， 能夠?qū)ψ贤鈪^(qū)域內(nèi)1mm以下進(jìn)行檢測(cè)，具有良好的度。

1 光的基本知識(shí) 光主要是由光量子所構(gòu)成，具有十分顯著的二重性，也就 是微粒不連續(xù)性與波動(dòng)連續(xù)性，光在波長(zhǎng)與頻率上面具有波動(dòng) 特征，能夠通過(guò) λ = c v 表示。其中 λ表示光所具有的波長(zhǎng)，波長(zhǎng) 為振動(dòng)相同臨界點(diǎn)之間所具有的距離，v表示光頻率，也就是光 在每秒內(nèi)振動(dòng)的次數(shù)，c表示光傳播速度。 光屬于電磁波內(nèi)的一種。在自然界內(nèi)的電磁波類(lèi)別較多， 電磁爐波長(zhǎng)不同，分光光度法所應(yīng)用到的光譜主要控制在 200mm與10 υ 之間，其中包含三個(gè)光驅(qū)，分別是紫外光區(qū)、可見(jiàn) 光區(qū)與紅外光區(qū)。

2 吸收光譜原理 分子在物質(zhì)內(nèi)運(yùn)動(dòng)可以分為三種形式，分別是電子運(yùn)動(dòng)、 分子內(nèi)原子振動(dòng)、分子自身轉(zhuǎn)動(dòng)，所以一共具有三個(gè)能級(jí)，分別 是電子能級(jí)、振動(dòng)能級(jí)、轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)。光在照射分子之后，分子將 會(huì)吸收光的能量，進(jìn)而產(chǎn)生能級(jí)躍遷，也就是完成從基態(tài)能級(jí) 到激發(fā)能級(jí)的轉(zhuǎn)變。不同能級(jí)所需要的能量數(shù)量也不同，這就 需要應(yīng)用不同電磁波進(jìn)行激發(fā)。電子能級(jí)在躍遷過(guò)程中所需 要的能量要是越多，基本上都處于可見(jiàn)光區(qū)域或者是紫外光區(qū) 域內(nèi)，這種光譜被稱(chēng)之為紫外光及可見(jiàn)光光譜。分子在被紅外 線(xiàn)照射之后，分子所吸收到的能量無(wú)法完成電子能級(jí)的躍遷， 僅僅能夠讓分子完成振動(dòng)能級(jí)與轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)之間的轉(zhuǎn)換，進(jìn)而所 得到的光譜也就是紅外光譜。分子要是被比外紅外線(xiàn)光源進(jìn) 行照射，分子僅僅能夠完成轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)的轉(zhuǎn)變，這樣所得到的光 譜為遠(yuǎn)紅外光譜。物質(zhì)所具有的結(jié)構(gòu)要是不同，在完成能級(jí)躍 遷過(guò)程中所需要吸收的能量也就存在一定差異，對(duì)于光源吸收 速度也就不同，不同物質(zhì)都具有自身特殊的光帶，進(jìn)而人們就 能夠?qū)Σ煌镔|(zhì)進(jìn)行分辨。這也是光度法在實(shí)際應(yīng)用分析的 前提條件。按照郎伯比耳定律可知，溶液、溫度與光源波長(zhǎng)在 相同情況之下，溶液內(nèi)所具有的光密度與溶液厚度之間應(yīng)該呈 現(xiàn)正比例關(guān)聯(lián)；要是溶液厚度要是一定的情況下，溶液濃度與 光密度僅僅具有關(guān)聯(lián)，被測(cè)物質(zhì)濃度與吸光度之間呈現(xiàn)正比例 關(guān)聯(lián)，光度法在分析過(guò)程中就是應(yīng)用該理論依據(jù) 。

3 分光光度計(jì)構(gòu)造原理 復(fù)合光在經(jīng)過(guò)分光系統(tǒng)之后，會(huì)分散成為不同波長(zhǎng)的單色 光，對(duì)其中任意一個(gè)波長(zhǎng)單色光進(jìn)行分析研究，能夠?qū)y(cè)試物 質(zhì)光吸收能力進(jìn)行判斷，這種方法就是分光光度法。分光光度 法在測(cè)量過(guò)程中所應(yīng)用到的設(shè)備稱(chēng)之為分光光度計(jì)。雖然分 光光度計(jì)型號(hào)存在一定差異，但是分光光度計(jì)的結(jié)構(gòu)基本相 同，主要有五部分構(gòu)成，分別是光源、單色器、樣品吸收池、檢測(cè) 系統(tǒng)與信號(hào)指示系統(tǒng) 。

3.1光源 能夠被作為光源的較多，例如鎢燈、鹵鎢燈、激光、紅外線(xiàn) 等。例如鎢燈要是作為光源，所產(chǎn)生的光譜為連續(xù)光譜，適合 在3600000nm 范圍內(nèi)應(yīng)用，在應(yīng)用過(guò)程中具有良好的穩(wěn)定性， 主要是作為可見(jiàn)光光源。

3.2單色器 單色器是分光光度計(jì)基礎(chǔ)構(gòu)建，主要是將混合光源轉(zhuǎn)變?yōu)?單色光，同時(shí)為檢測(cè)提供針對(duì)波長(zhǎng)光源。單色器主要由四部分 構(gòu)成，分別是入口狹縫、出口狹縫、色散元件及準(zhǔn)直鏡，其中 為重要元件為色散元件，色散元件還可以分為棱鏡與光柵兩種 類(lèi)別。 3.2.1棱鏡 棱鏡主要作用是將混合光分解為單色光，正常情況下為三 角柱體。棱鏡要是由不同原材料生產(chǎn)而成，透光范圍也存在一 定差異。棱鏡要是應(yīng)用玻璃制成，所得到的光譜就是可見(jiàn)光 譜；要是應(yīng)用石英制成，所得到的光譜就是紫外光譜 。

3.2.2光柵單色器 光柵還可以作為單色器內(nèi)的色散構(gòu)建，主要是在金屬表面 上刻畫(huà)出多個(gè)槽，需要特別注意不同槽之間距離應(yīng)該相等，并 且相互平行。光在經(jīng)過(guò)槽反射之后，容易出現(xiàn)色散情況。部分 分光系統(tǒng)就是以光柵作為基礎(chǔ)理論，在玻璃或者是石英表面上 刻畫(huà)出多個(gè)槽，通過(guò)光干涉及衍射特征，完成混合光分散操作， 得到針對(duì)性光譜。

3.3 狹縫 狹縫主要表示光路上面由隔板所形成的縫隙，主要作用對(duì) 單色光強(qiáng)度及純度進(jìn)行調(diào)節(jié)，同時(shí)也能夠?qū)紊夥直媪υ斐?影響。狹縫寬度基本上控制在2mm之內(nèi)，棱鏡分散能力也會(huì)根 據(jù)波長(zhǎng)的改變發(fā)生變化，分光光度計(jì)所具有的狹縫寬度能夠與 棱鏡分散能力一共進(jìn)行調(diào)整。

3.4 檢測(cè)器系統(tǒng) 盡速在光源照射之下會(huì)產(chǎn)生電流，光源強(qiáng)度要是越大，電 流數(shù)值也就會(huì)越高，也就是光電效應(yīng)。檢測(cè)器系統(tǒng)主要是根據(jù) 檢測(cè)器所產(chǎn)生的光電流進(jìn)行檢測(cè)，完成對(duì)數(shù)字結(jié)果的轉(zhuǎn)變。

4 結(jié)語(yǔ) 分光光度法與分光光度計(jì)在實(shí)際應(yīng)用過(guò)程中，主要應(yīng)用在 溶液內(nèi)物質(zhì)濃度檢測(cè)上面，通過(guò)分析溶液吸光度差異，能夠得 到不同溶液所具有的吸光度，進(jìn)而繪制標(biāo)準(zhǔn)示意圖，這樣就能 夠了解未知溶液吸光度，進(jìn)而了解未知溶液所具有的濃度，具 有良好的靈敏性與抗干擾性。