紫外可見分光光度計的外光路系統(tǒng)一般由光源、反射鏡或透鏡組成;光源一般都是由氘燈和鎢燈(鹵鎢燈)及其燈架組成;反射鏡一般用凹面反射鏡。有些儀器的外光路系統(tǒng)采用透鏡或柱面鏡。這些鏡子的作用是把光源發(fā)出的光成像在單的人射狹縫上。或者說,把光源發(fā)出的光,集中到單色器的入射狹縫上,并均勻照明單色器的入射狹縫。有時候也講,光源的燈絲和入射狹縫是物像關(guān)系。
紫外可見分光光度計的外光路大體上有以下幾種形式。
①氘燈和鎢燈位于凹面反射鏡的同側(cè),并固定不動。光源切換是通過電機帶動平面反射鏡振動來實現(xiàn)的。
②氘燈和鎢燈位于凹面反射鏡的兩側(cè),氘燈和鎢燈固定不動,凹面反射鏡運動。光源切換是通過電機帶動凹面反射鏡旋轉(zhuǎn)來實現(xiàn)的。
③氘燈和鎢燈固定在一個組座上,凹面反射鏡是固定的。光源切換是通過電機帶動氘燈和鎢燈固定組座移動來實現(xiàn)的。
④若采用氘鎢燈(氘燈和鎢燈作在一起),則氘鎢燈位于凹面鏡的左側(cè)或右側(cè),凹面鏡固定不動,光源通過凹面鏡成像在入射狹縫上。
(1)測量波長
在定量分析中,為了提高測定的靈敏度,入射光的波長應(yīng)選擇被測物的zui大吸收波長λmax,如果λmax有干擾,可選擇另一條靈敏度稍低、但能避免干擾的譜線,所以,適當選擇入射光的波長,不僅能提高測定的靈敏度,還能提高測定的準確度。
(2)狹縫寬度
狹縫寬度過大,入射光的單色性差;狹縫寬度太小,入射光的強減弱。狹縫寬度過大或過小均會造成靈敏度降低,*選擇是產(chǎn)生zui小誤差情下的zui大狹縫。一般選用儀器的狹縫寬琶度應(yīng)小于待測樣品吸收帶的半寬度,否則測得的吸光度值會偏低,狹縫寬度的選擇應(yīng)以減少狹縫寬度時供試品的吸光度不再;加為準,對于大部分被測品種,可以使用2nm縫寬。
(3)控制適當?shù)奈舛确秶?/div>
可通過控制被測物濃度或改變吸收池厚度來實現(xiàn)吸光度合理的范圍,以盡量減小測量誤差。一般吸光度盡量控制在0.1-0.8范圍。
(4)空白溶液的選擇
空白溶液是用來調(diào)節(jié)吸光度測量工作零點即A=0,T=100%的溶液,以消除溶液中其它基體組分以及吸收池和溶劑對入射光的反射和吸收所帶來的誤差。根據(jù)情況不同,常用空白溶液有如下幾種選擇。
①溶劑空白 當溶液中只有待測組分在測定波長下有吸收,而其它組分無吸收時,可用純?nèi)軇┳骺瞻住?/div>
②試劑空白 如果顯色劑或其它試劑有吸收,而待測試樣溶液無吸收,則用不加待測組分的其它試劑作空白。
③試樣空白 如果試樣基體有吸收,而顯色劑或其它試劑無吸收,則用不加顯色劑的試樣溶液作空白。