紫外可見分光光度計己二酰肼含量測定法

本法系依據(jù)在四硼酸鈉存在的條件下，己二酰肼

( A D H ) 中的氨基基團能與三硝基苯磺酸（T N B S ) 發(fā)生

顯色反應(yīng)，采用紫外-可見分光光度法測定b 型流感嗜血

桿菌多糖衍生物中己二酰胼的含量。

試劑 （1 ) 己二酰肼對照品貯備液（lmg/ml) 精

密稱定己二酰肼0. I00g，加水定容至100ml，于一20DC

保存。

( 2 )己二酰肼對照品工作液（20Mg/ml) 精密量取

A D H 對照品貯備液0.2ml，加水定容至10ml。

(3) 5 % 四硼酸鈉溶液稱取四硼酸鈉（Na2B40 7 •

10H2O) 47.35g,加水定容至500ml，于室溫保存。

(4) 3 % T N B S溶液量取T N B S 5ml, 加水定容至

50ml，于一20°C保存。

測定法量取5 % 四硼酸鈉溶液1.0ml，加水lml，

混勻，再加人3 % T N B S 溶液0.3ml，混勻，于享溫放置

15分鐘，在波長500mn處測定吸光度，作為空白對照。

先將供試品用水稀釋至己二酰肼濃度不高于2CVg/ml，

作為供試品溶液，然后取1.0ml，加人5% 四硼酸鈉溶

液1.0ml，自“加人3 % T N B S 溶液0.3ml” 起同法

操作。

分別取己二酰胼對照品工作液0. 2ml、0. 4ml、

0.6ml、0.8ml、1.0ml于試管中，每管依次加水0.8ml、

0.6ml、0.4ml、0.2ml、O m l ,加人5% 四硼酸鈉溶液

1. 0 m l ,自“加入3 % T N B S溶液0.3ml”起同法操作。

結(jié)果計算以己二酰肼對照品工作液的濃度對其相應(yīng)

的吸光度作直線回歸，求得直線回歸方程，將供試品溶液

的吸光度代人直線回歸方程，求出供試品溶液的己二酰肼

含量，根據(jù)稀釋倍數(shù)計算供試品的己二酰肼含量。