熒光分光光度計(jì)是一種常用的分析儀器,用于掃描液相熒光標(biāo)記物所發(fā)出的熒光光譜,產(chǎn)品具有性能穩(wěn)定、使用靈活、可靠性高、維護(hù)簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)。用戶應(yīng)該怎樣使用熒光分光光度計(jì)產(chǎn)品呢?下面小編就來具體介紹一下熒光分光光度計(jì)的操作方法,希望可以幫助到大家。
(一)樣品準(zhǔn)備
1.液體樣品根據(jù)用戶提供的技術(shù)指標(biāo),檢查濃度范圍是否合適,如果需要稀釋,則要考慮所需溶劑類型和稀釋倍數(shù)。
2.固體樣品均勻粉末、片狀或具有光滑平面的塊狀樣品,均可直接測(cè)定。
(二)操作步驟
1.開機(jī):接通電源,打開主機(jī)開關(guān),點(diǎn)燃(打開)光源后,根據(jù)說明書要求啟動(dòng)計(jì)算機(jī)。
2.檢測(cè)前準(zhǔn)備:參照儀器說明書,在20天內(nèi)至少進(jìn)行一次激發(fā)校準(zhǔn)和發(fā)射校準(zhǔn),檢測(cè)前儀器應(yīng)預(yù)熱。
3.工作條件的選擇:環(huán)境溫度應(yīng)在20℃±5℃;相對(duì)濕度不大于70%;電源穩(wěn)定,無磁場(chǎng)、電場(chǎng)干擾。根據(jù)樣品的特性及熒光強(qiáng)度,選擇合適的儀器工作條件(如狹縫、PM增益、響應(yīng)時(shí)間等)。
4.基本測(cè)定
(1)熒光激發(fā)光譜測(cè)定
設(shè)置儀器參數(shù),掃描發(fā)射波長(zhǎng),找到maxλem,以此為發(fā)射波長(zhǎng),記錄發(fā)射強(qiáng)度作為激發(fā)波長(zhǎng)的函數(shù),便得到激發(fā)光譜。
(2)熒光發(fā)射光譜測(cè)定
設(shè)置儀器參數(shù),掃描激發(fā)波長(zhǎng),找到maxλex,以此為激發(fā)波長(zhǎng),記錄發(fā)射強(qiáng)度與發(fā)射波長(zhǎng)間的函數(shù)關(guān)系,便得到熒光發(fā)射光譜。
(3)差譜測(cè)定
設(shè)置儀器參數(shù),選擇合適的工作方式,測(cè)定背景溶液的發(fā)射光譜并儲(chǔ)存起來,在一定的工作方式下,掃描樣品溶液的發(fā)射波長(zhǎng),得到當(dāng)時(shí)的光度值和儲(chǔ)存的背景值之間的差示值,即差譜。
(4)峰面積積分
選擇適當(dāng)?shù)墓ぷ鞣绞剑瑢?duì)樣品溶液進(jìn)行積分操作,即得到峰面積積分。
(5)熒光強(qiáng)度
選擇合適的測(cè)量參數(shù),設(shè)置λex、λem,采用定點(diǎn)讀數(shù)或掃描方式,即可測(cè)得所選波長(zhǎng)處的熒光強(qiáng)度。
(6)定量測(cè)定
配制一系列已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液,在一定的測(cè)定條件下,設(shè)置λex、λem,按照由稀至濃的次序,測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光強(qiáng)度,繪制熒光強(qiáng)度—濃度的工作曲線,不改變儀器參數(shù)測(cè)定未知溶液的熒光強(qiáng)度,由工作曲線即可求出未知溶液的濃度。
(三)分析結(jié)果的表述
1.熒光激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及其他光譜由儀器控制電腦直接繪出。
2.峰面積積分、熒光強(qiáng)度由儀器控制電腦計(jì)算顯示。
3.定量測(cè)試:在相同的測(cè)定條件下,測(cè)定一系列已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光強(qiáng)度,繪制出熒光強(qiáng)度-濃度的工作曲線。濃度未知的溶液的熒光強(qiáng)度測(cè)定后,由工作曲線求出該溶液的濃度。
熒光分光光度計(jì)使用注意事項(xiàng)
1.在實(shí)驗(yàn)開始前,應(yīng)提前打開儀器預(yù)熱,并配制好所需的溶液,對(duì)于已經(jīng)配制好的溶液,在不用時(shí)放在4℃冰箱中保存,放置時(shí)間超過一星期的溶液要重新配制。
2.實(shí)驗(yàn)所用的樣品池是四面透光的石英池,拿取的時(shí)候用手指掐住池體的上角部,不能接觸到四個(gè)面,清洗樣品池后應(yīng)用擦鏡紙對(duì)其四個(gè)面進(jìn)行輕輕擦拭。
3.在測(cè)試樣品時(shí),注意熒光強(qiáng)度范圍的設(shè)定不要太高,以免測(cè)得的熒光強(qiáng)度超過儀器的測(cè)定上限。
4.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,要及時(shí)的清理臺(tái)面,處理廢液,清洗和放置好