UV1901PC紫外分光光度計(jì)測(cè)多巴胺含量

UV1901PC紫外分光光度計(jì)測(cè)多巴胺含量的原理是根據(jù)多巴胺與亞硝酸鈉在pH5.90時(shí)的反應(yīng)產(chǎn)物在300nm處有zui大吸收,多巴胺質(zhì)量濃度在0~10LgPmL范圍內(nèi)與吸光度之間遵從朗伯比爾定律,表觀摩爾吸光系數(shù)為1.85@104L#mol-1#cm-1,檢測(cè)限為0.1LgPmL。

多巴胺是一種神經(jīng)傳遞物質(zhì),在體內(nèi)是合成去甲腎上腺素的直接前體,具有重要的生理作用。作為藥物,能增強(qiáng)心肌收縮力,對(duì)內(nèi)臟血管有擴(kuò)張作用,增加血流量,有利于改善休克時(shí)重要臟器的血

液供應(yīng),適用于感染性、心源性、失血性休克以及心臟停搏時(shí)起搏升壓。

因多巴胺與四氯苯醌之間的荷移反應(yīng),用UV1901PC紫外分光光度計(jì)測(cè)定針劑中的多巴胺從甜馬鈴薯中提取多酚氧化酶,將多巴胺氧化為相應(yīng)多巴胺色素,建立了測(cè)定藥劑中多巴胺的分光光度法,但操作繁雜。本研究依據(jù)多巴胺與亞硝酸鈉在水介質(zhì)中即可生成有較高吸光度產(chǎn)物的反應(yīng),建立了測(cè)定多巴胺注射液中多巴胺含量的分光光度法。該法操作簡(jiǎn)便,靈敏迅速,有寬的線(xiàn)性范圍,與英國(guó)藥典規(guī)定的液相色譜法對(duì)照,結(jié)果吻合。

1實(shí)驗(yàn)部分

1.1儀器

UV1901PC紫外分光光度計(jì)(上海奧析);

UV1901PC紫外分光光度計(jì)采用濱松無(wú)臭氧環(huán)保型氘燈，普通長(zhǎng)壽命氘燈會(huì)有臭氧產(chǎn)生，長(zhǎng)期吸入對(duì)身體有害，無(wú)臭氧長(zhǎng)壽命氘燈就可以有效避免。UV1901PC紫外分光光度計(jì)還采用德國(guó)歐士朗鎢燈，美國(guó)派來(lái)芝檢測(cè)器，雙光束光學(xué)系統(tǒng)，加厚光學(xué)底板，更能保證儀器的穩(wěn)定性。操作界面和操作系統(tǒng)都是簡(jiǎn)便快捷版的，減少了檢測(cè)時(shí)間的同時(shí)，增加準(zhǔn)確性.吸光度可以到小數(shù)點(diǎn)后四位?？蛇x配多種附件，自動(dòng)四聯(lián)池，七聯(lián)池，恒溫裝置，透過(guò)率固體架，反射率固體架等。

UV1901PC紫外分光光度計(jì)的顯示方式：6英寸 320×240 點(diǎn)陣帶背光數(shù)字 LCD

光源燈：預(yù)調(diào)日本濱松無(wú)臭氧環(huán)保型氘燈 歐司朗長(zhǎng)壽命鹵鎢燈

光學(xué)系統(tǒng)：精密雙光束光學(xué)系統(tǒng)

接口：RS232C串行通訊口用于接配軟件，并行打印口用于接配打印機(jī)

光譜掃描功能：主機(jī)及軟件支持

電源電壓：100V～240V   50/60±1Hz

儀器尺寸：650×450×220（mm）

凈重：25Kg

特點(diǎn)

UV1901PC紫外分光光度計(jì)的光學(xué)系統(tǒng)設(shè)計(jì)和電路控制系統(tǒng)設(shè)計(jì)十分嚴(yán)謹(jǐn),元器件的選用控制嚴(yán)格,具有高標(biāo)準(zhǔn)的準(zhǔn)確度、重復(fù)性、低噪聲和低雜散光指標(biāo)，線(xiàn)性范圍和穩(wěn)定性指標(biāo)也十分出色。有1nm和2nm帶寬兩種配置適合不同用戶(hù)選擇，大屏幕LCD顯示，具高測(cè)量精度和穩(wěn)定性，是一款高品質(zhì)的儀器。

UV1901PC紫外分光光度計(jì)使用日本濱松無(wú)臭氧環(huán)保型氘燈，使用壽命達(dá)到2000小時(shí)，光輸出可保持穩(wěn)定直至其使用壽命，替換極為方便。

UV1901PC紫外分光光度計(jì)提供2種操作模式：主機(jī)測(cè)量模式或軟件控制測(cè)量模式。

內(nèi)建的SCM技術(shù)和定性定量分析軟件能實(shí)現(xiàn)數(shù)據(jù)采集與處理、光譜測(cè)量、動(dòng)力學(xué)測(cè)量、定量分析、DNA測(cè)定和光譜掃描等擴(kuò)展功能。菜單下拉式分析軟件易于操作。

UV1901PC紫外分光光度計(jì)具有開(kāi)放式的樣品室，可選配反射樣品架、固體樣品架、恒溫水浴和自動(dòng)進(jìn)樣器等適合于不同的應(yīng)用。

單機(jī)掃描曲線(xiàn)可以存儲(chǔ)9條，工作曲線(xiàn)可以存儲(chǔ)9條。聯(lián)機(jī)模式儲(chǔ)存數(shù)量不限。

pHS-3C型酸度計(jì)(上海雷磁儀器廠)。

多巴胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液100LgPmL(化學(xué)對(duì)照品,中國(guó)藥品生物制品檢定所),準(zhǔn)確稱(chēng)取0.01g多巴胺,用二次水稀釋至100mL,4e儲(chǔ)存,用時(shí)稀釋為40LgPmL的工作液。NaNO2(10gPL)水溶液,避光保存。HAc-NaAc緩沖溶液(pH5.90),0.1molPLHAc和0.1molPLNaAc以1B16的體積比混合。

所用試劑均為分析純,實(shí)驗(yàn)用水均為二次水。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

準(zhǔn)確移取40LgPmL的多巴胺標(biāo)準(zhǔn)液2mL于10mL比色管中,加NaNO2溶液2mL,HAc-NaAc緩沖溶液5mL,搖勻,置于沸水浴中加熱3.5min。取出用流水冷卻至室溫,用水稀釋至刻度,搖勻。以試劑空白為參比,用1cm比色皿在300nm處測(cè)量其吸光度。

2結(jié)果與討論

2.1吸收光譜

按實(shí)驗(yàn)方法配制溶液后,在分光光度計(jì)上,以試劑空白為參比掃描溶液的吸光度,得到吸收光譜如圖1所示。由圖可見(jiàn),反應(yīng)產(chǎn)物Kmax=300nm。NaNO2的Kmax為356nm;多巴胺的Kmax為279nm。

2.2反應(yīng)影響因素研究

2.1加熱時(shí)間影響

多巴胺在加熱不同時(shí)間后的吸光度,結(jié)果表明加熱時(shí)間為3~4min時(shí),吸光度zui大。所以選擇加熱時(shí)間為3.5min。

2.2pH的影響按實(shí)驗(yàn)方法測(cè)量不同pH值時(shí)溶液的吸光度,

結(jié)果如圖2所示。

圖1圖2

由圖可見(jiàn),pH5.9時(shí),溶液的吸光度zui大。所以選擇pH5.9的HAc-NaAc緩沖溶液,但要嚴(yán)格控制pH值,每次加入緩沖溶液510mL。

2.3試劑用量影響按照實(shí)驗(yàn)方法,保持多巴胺濃度不變,逐步增大NaNO2(10gPL)的加入量,測(cè)定溶液的吸光度。結(jié)果發(fā)現(xiàn),隨著NaNO2加入量的增大,溶液的吸光度逐漸增大;當(dāng)加入量\1.5mL時(shí),溶液的吸光度基本不變,所以確定*加入量為2mL。

2.4試劑加入順序影響按照實(shí)驗(yàn)方法,依照不同順序加入試劑,測(cè)量溶液的吸光度,結(jié)果表明試劑加入的*順序?yàn)橄燃?/span>NaNO2后加HAc-NaAc緩沖溶液。

2.2.5產(chǎn)物的穩(wěn)定性按照實(shí)驗(yàn)方法,測(cè)定放置不同時(shí)間后溶液的吸光度,結(jié)果表明,放置時(shí)間在90min之內(nèi)溶液的吸光度基本不變,產(chǎn)物比較穩(wěn)定。

2.3選擇性

按照實(shí)驗(yàn)方法,研究4LgPmL多巴胺水溶液中各種外來(lái)常見(jiàn)離子對(duì)體系的影響,控制測(cè)定誤差在5%以?xún)?nèi),下列離子的允許存在量(LgPmL)為:K+(30)、Mg2+(25)、Cu2+(25)、Pb2+(10)、Cl-(60)、Ca2+(10)、Zn2+(100)、HPO42-(10)、PO43-(6)、SO42-(300)

2.4方法特性

2.4.1標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)按實(shí)驗(yàn)方法配制多巴胺的標(biāo)準(zhǔn)系列,分別測(cè)定其吸光度,實(shí)驗(yàn)表明多巴胺的濃度在0~10LgPmL范圍內(nèi)與吸光度呈線(xiàn)性關(guān)系,線(xiàn)性回歸方程為:A=010436c+0100591,r=0.9978。

2.4.2檢測(cè)限平行測(cè)定試劑空白的吸光度,按照空白加3倍標(biāo)準(zhǔn)偏差所對(duì)應(yīng)的濃度,檢測(cè)限為0.1LgPmL。

2.4.3精密度按照實(shí)驗(yàn)方法將同一樣品測(cè)定10次,多巴胺的平均質(zhì)量濃度為2.0LgPmL,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為5.3%。

2.5樣品分析

2.5.1多巴胺注射液樣品分析多巴胺的注射液

用二次水稀釋至不同濃度,作為樣品溶液進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果見(jiàn)表1。從表可看出,用分光光度法測(cè)定

所得結(jié)果與用HPLC法相符,在置信度等于95%,用Cochran檢驗(yàn)兩種方法間不存在顯著性差異。

表1樣品的測(cè)定

5.2回收率按實(shí)驗(yàn)方法,測(cè)定多巴胺注射液的回收率,結(jié)果如表2所示。

表2

結(jié)論

本文建立了用分光光度法測(cè)定多巴胺注射液中多巴胺的方法,該法操作簡(jiǎn)單,檢出限低,線(xiàn)性范圍較寬。