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UV1901PC紫外可見分光光度計(jì)法測定水楊酸的含量
更新時(shí)間:2017-05-09 點(diǎn)擊次數(shù):2873

UV1901PC紫外可見分光光度計(jì)法測定水楊酸的含量 

.UV1901PC紫外可見分光光度計(jì)簡介

分光光度計(jì)已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器。常用于核酸,蛋白定量以及細(xì)菌生長濃度的定量。

.UV1901PC紫外可見分光光度計(jì)法原理

分光光度法是在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)光的吸收度,對物質(zhì)進(jìn)行定性或定量分析。

分光光度計(jì)采用一個(gè)可以產(chǎn)生多個(gè)波長的光源,通過系列分光裝置,從而產(chǎn)生特定波長的光源,光線透過測試的樣品后,部分光線被吸收,計(jì)算樣品的吸光值,從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。

紫外吸收光譜的定性分析為化合物的定性分析提供了信息依據(jù)。由于分子結(jié)構(gòu)不同但只要具有相同的生色團(tuán),它們的zui大吸收波長值就相同。因此,通過對末知化合物的掃描光譜、zui大吸收波長值與已知化合物的標(biāo)準(zhǔn)光譜圖在相同溶劑和測量條件下進(jìn)行比較,就可獲得基礎(chǔ)鑒定。 

1-苯甲酸;2-水楊酸 

水楊酸在波長300 nm處有吸收峰,而苯甲酸此處無吸收,在波長230 nm兩組吸收峰重疊,為了避開其干擾,選用300 nm波長作為測定水楊酸的工作波長。由于乙醇在250350nm無吸收干擾,因此可用60%乙醇為參比溶液。

.儀器與試劑 

1.儀器 

UV1901PC紫外可見分光光度計(jì);容量瓶100mL 1個(gè)、50mL 5個(gè);刻度吸量管1mL2mL、5mL1 。 2.試劑 

水楊酸對照品(分析純);60%乙醇溶液(自制)。

 

 四、實(shí)驗(yàn)步驟 

1、標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備:準(zhǔn)確稱取0.0500 g水楊酸置于100 mL燒杯中,用60%乙醇溶解后,轉(zhuǎn)移到100 mL容量瓶中,以60%乙醇稀釋至刻度,搖勻。此溶液濃度為0.5mg·mL-1。 

2、將五個(gè)50mL容量瓶按1-5依次編號(hào)。分別移取水楊酸標(biāo)準(zhǔn)溶液0.50、1.00、2.003.00、4.00mL于相應(yīng)編號(hào)容量瓶中,各加入60%乙醇溶液,稀釋至刻度,搖勻。 

3、用1 cm石英吸收池、,以60%乙醇作為參比溶液,在200350 nm波長范圍內(nèi)測定一份水楊酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的紫外吸收光譜,確定zui大吸收波長。 

4、在選定波長下,以60%乙醇為參比溶液,由低濃度到高濃度測定水楊酸標(biāo)準(zhǔn)溶液系列及未知液的吸光度。以水楊酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度為縱坐標(biāo),濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)水楊酸試液的吸光度,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算水楊酸試樣中水楊酸的含量。 

 

五、數(shù)據(jù)處理 

  1. 根據(jù)某一濃度下的全波長掃描圖,確定*吸收波長。

 2、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算工作曲線方程及R2值。

 3、計(jì)算未知樣中水楊酸的濃度。 

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